脓毒症造模方法之CLP造模法

      尽管对脓毒症的研究不断深入，其复杂的发病机制和病理生理学仍谜团重重。全球范围内，脓毒症的发病率与死亡率持续攀升，成为重症患者死亡的主要元凶，严重威胁公众健康，并带来巨大社会负担。当前，尚无针对脓毒症的特效药物问世。构建精准的疾病模型，对探索有效治疗策略、实现早期诊断与干预、进而优化患者预后至关重要。

1. 建立脓毒症动物模型的基本要求

      构建脓毒症动物模型需精准模拟其病理生理：初为促炎反应，后转免疫抑制，两者平衡提升生存率。模型应涵盖两阶段血流动力学变化：初为高排低阻，心输出减而外周阻增；后转低排低阻，伴低血容量休克，心输出与外周阻双降。此血流动力学变化，是评估模型与临床脓毒症相似度的关键指标，确保研究的有效性与针对性。

2. 脓毒症动物模型须具备的基本要素

      脓毒症动物模型需展现高排低阻血流动力学与高代谢，伴随多器官功能受损，自然死亡率介于50%至70%，以模拟真实临床情境。此模型强调炎症反应过度而非直接细菌毒素损伤，故器官功能受损及死亡应在建模后6至12小时内显现，归因于全身炎症反应综合征，确保模型准确反映脓毒症病理过程及其时间依赖性特征。

3. 实验动物的选择

      在制作动物模型时多选用雄性小鼠，因为雌性小鼠较雄性小鼠更能耐受脓毒症和失血性休克，且进入发情期的雌性小鼠性激素水平变化很大，而雄性小鼠在脓毒症时更易于发生免疫抑制。

问：为什么选择CLP模型？

答：盲肠结扎穿孔模型（CLP）模型是最接近于人类脓毒症机制的模型，被称为脓毒症模型的“金标准”。CLP 技术在20世纪70年代被建立。CLP 模型非常适宜用于防治脓毒症或脓毒性休克新药的临床前观察

4. 造模方法

CLP脓毒症模型构建流程简述：首先，通过盲肠远端结扎诱导局部组织坏死，激发初步炎症反应；随后，盲肠穿刺使肠内容物外泄，引发腹膜多菌感染，导致腹膜炎，最终触发全身性炎症反应。

具体操作为：对大鼠进行腹腔麻醉及消毒后，于腹部正中切开约2cm小口，暴露并分离盲肠远端系膜，使用无菌4号丝线在盲肠远端1/2处牢固结扎，再以无菌7号针头于结扎远端中央穿刺，确保穿孔后，将盲肠复位并缝合腹腔。

5. 影响因素

      盲肠结扎位置在CLP模型中起决定性作用，影响死亡率与病情严重程度。结扎盲肠25%以下时，死亡率极低，为轻度脓毒症；50%-60%结扎则致中度脓毒症，术后死亡率达60%；而75%以上结扎则引发重度脓毒症，小鼠多在术后2-3天内死亡，且死亡高峰在建模初48小时内。通过调整结扎长度和穿刺针径，可调控脓毒症程度。长结扎和高针径均加剧病情，但结扎位置影响更为显著。CLP术后6小时即现菌血症，12小时现症状，18小时起死亡。因此，构建CLP模型需精细控制实验条件与技术参数，确保结果可重复且一致，这要求实验人员具备深厚的专业知识和熟练的操作技能。

6. 造模评价

      该模型通过动物自体感染模拟脓毒症，类似临床特点包括连续细菌感染源、高内毒素与细菌检出率、体温下降及血流动力学变化。建模同时模拟临床治疗，如液体复苏与抗菌治疗，确保高可控性与标准化。脓毒症严重程度受盲肠结扎长度、穿孔针径及支持治疗调控。特别是，结扎长度是关键，其增加会提升促炎细胞因子水平，直接影响模型病理程度。

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