HE染色介绍之染色结果及注意事项

一、注意事项

1.长时间福尔马林固定易致组织酸化，影响细胞核染色。为增强核着色，需延长自来水冲洗或碳酸锂溶液处理时间

（10-30分钟）。对于伊红染色中胞浆着色不足，可简单向伊红液中加1-2滴冰醋酸来改善。

2. 切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚(晰)而细胞质基本无色为

佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。

3. 切片脱水后入二甲苯若出现白色不透明，表明脱水未彻底。此时需将切片返回无水酒精阶段，并更换新酒精和二甲苯，确保彻底脱水与透明处理，以提升切片质量。

4. 染色全程需保持切片湿润，防干燥致收缩变形，影响细胞形态观察。操作前后，特别是涉及二甲苯时，务必清洁切片边缘，去除多余液体，确保染色均匀，保护组织完整性。

5. 染色全程需保持切片湿润，防干燥致收缩变形，影响细胞形态观察。操作前后，特别是涉及二甲苯时，务必清洁切片边缘，去除多余液体，确保染色均匀，保护组织完整性。

二、结果的判断和异常分析

1. 实验结果

细胞核经苏木精染为鲜明蓝，软骨基质与钙盐则深蓝，粘液显灰蓝。伊红赋予细胞浆多样粉彩，从浅粉至桃红，嗜酸性颗粒尤为鲜亮红。胶原纤维淡粉，弹力纤维亮粉，红血球橘红生动，而蛋白性液体则温婉粉红，共同绘制出组织结构的绚烂画卷。

着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。

2. 异常结果

（1）红蓝失调：红蓝色彩失衡时，偏蓝或偏红各有其因。偏蓝或因苏木素染色超时、分化不足，或伊红效能丧失、染色时短分化过强；反之，偏红则可能源于苏木素染色不足、分化过度、脱蜡不彻底，以及伊红染色超时、分化不够。针对具体原因，需调整染色时长、增强分化效果或更换试剂，以恢复色彩平衡。

（2）HE染色后出现的大白色斑块或斑点：脱蜡不充分，可适当增加脱蜡时间以及更换新鲜的二甲苯。

（3）细胞核染色过浅：苏木素染色不足、失效或分化过度时，可重染。将切片依次置于0.01%氢氧化钠、0.5%氨水、饱和碳酸氢钠、乙醇中，各3-5分钟，再行染色。为增强核染色，Zenker液固定片可泡5%碳酸氢钠3小时，Bouin液固定片则泡1小时，后冲洗并染色。

（4）细胞核染色过深，胞浆着蓝色：苏木素染色过久、切片过厚或分化不足时，先查切片厚度（宜1-2层核）。解决方案：可重染或重制切片，确保染色效果与切片质量。

（5）细胞核呈棕红色改变：苏木素失效或反蓝不足时，换液或浸泡于自来水(pH7.5-7.8)、稀释氨水或0.2%碳酸氢钠中，以增强反蓝效果。

（6）伊红染色较淡：伊红的pH发生了改变(pH可能已大于5)，或反蓝液体未漂洗干净，残留后影响胞浆嗜酸性染色，或者切片太薄并且在随后的脱水步骤停留过久。应检查伊红染色液pH，可使用乙酸调至4.6-5.0。根据具体原因，调整实验步骤。

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