HE染色介绍之染色程序

一、染色步骤

1. 预热与初步处理

石蜡溶解预热：首先，将切片置于70℃的原位杂交仪中，进行30分钟的预热烤片处理，以确保石蜡完全软化。

2. 脱蜡步骤

二甲苯脱蜡：紧接着，迅速将预热后的切片浸入二甲苯中两次，每次持续5分钟，以彻底去除切片上的石蜡。

3. 梯度水化

乙醇梯度浸泡：随后，将切片依次放入100%、90%、80%、70%的乙醇溶液中各浸泡5分钟，最后置于蒸馏水中5分钟，实现组织的梯度水化。

4. 细胞核染色

苏木精染色：吸干水分后，滴加苏木精染色液覆盖组织，染色5分钟。随后，用流水冲洗去除多余染液，并在显微镜下检查染色效果。

5. 精细调整染色深度

分化与返蓝：使用1%盐酸酒精对切片进行快速分化（1-3秒），随后水洗并浸入氨水中直至部分区域恢复蓝色。根据显微镜下的颜色深浅，决定是否需要重复染色或增加分化时间。

6. 细胞质复染

伊红复染：在细胞核染色满意后，滴加0.5%伊红染液进行细胞质的快速复染（10-15秒），随后用蒸馏水清洗并显微观察。

7. 脱水与透明

乙醇梯度脱水：将切片依次通过80%、90%、95%及100%的乙醇溶液进行脱水处理。

二甲苯透明：最后，将切片浸入二甲苯中两次，每次5分钟，以达到完全透明的效果，并在室温下自然晾干。

8. 封片与观察

封片：在干燥后的切片上滴加一滴中性树胶，迅速盖上盖玻片完成封片。

观察与记录：等待24小时后，使用显微镜观察切片，并进行拍照记录。

二、原理

1. 分化作用

在HE染色过程中，分化是关键步骤，利用0.5%盐酸乙醇作为分化液，有效去除组织上多余的苏木精染料，特别是细胞核与细胞浆中过量结合的部分，以确保核与浆的清晰染色分界，为后续伊红染色奠定良好基础。此步骤确保了染色的准确性和细胞结构的可视化效果。

2. 返蓝作用

分化后，苏木精在酸碱条件下显色不同，经0.5%盐酸乙醇分化变红，需立即水洗终止。随后用弱碱性水（如0.2%氨水）或自来水（时间较长）进行返蓝处理，使细胞核恢复蓝色，这一过程称为蓝化或返蓝作用。

三、试剂

1. 苏木精染液：

称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，滤纸过滤。

2. 伊红染液：

称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中。或醇溶性伊红0.5 g，80%酒精100ml。

3. 1%盐酸酒精分化液：

按体积比为浓盐酸：无水乙醇 = 1:99配制。

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