脑缺血再灌注：电击成栓

一、模型应用

本模型通过电击小动物颈总动脉形成血栓，模拟临床溶栓过程，避免了外源性试剂和开颅手术。与传统线栓法相比，更接近实际情况且侵入性小，但血栓粒度难控制、操作复杂、设备成本高。目前，已针对大鼠和小鼠建立方法，并初步用于临床前药物研发。

 二、器械材料与实验动物

(1) 设备:恒温手术台，吸入麻醉系统YLS-14B 小动物血栓生成仪。

(2) 器械:解剖剪，镊子，微血管夹，显微镊。

(3) 材料:rt-PA10 mg/(4mL·kg)，利多卡因凝胶，6-0 缝合线。

(4) 实验动物:C57BL/6小鼠，雄性，体重20~ 30 g.

三、造模方法

(1) 小鼠常规吸入麻醉。

(2) 颈部备皮，仰卧于恒温手术台上。

(3) 用胶带将四肢伸展固定，垫高颈部。体温通过恒温手术台维持 37 ±0.5°℃。

(4) 常规手术消毒备皮区。

(5) 沿颈中线做一个2cm 皮肤切口，暴露颈总动脉。

(6) 分离结扎颈外动脉近心端。

(7) 将右颈总动脉近心端预置结扎线，以控制颈总动脉血流。

(8) 将颈总动脉钩入血栓生成仪电击夹中，并开启 0.35 mA 电击。

(9) 至血栓仪显示堵塞率达到100%时停止，总时长不超过1min。

(10) 使用显微镊从血管外夹碎血栓，并辅助血流推动血栓碎块进入颈内动脉。

(11) 第二次电击重复步骤(8)(9)。此时可见血管内形成长度约 0.5cm 的黑色血栓，边界清晰，颜色均一。用微血管夹夹闭颈总动脉远心端，避免血栓未经粉碎进入颈内动脉。重复步骤(10)的操作，直至血管壁基本没有血附着，颈内动脉起始部位可观察到一些碎栓块，此时再次用微血管夹夹闭颈总动脉，让血栓充分黏附在前循环相关血管内。

(12)5min后撤去微血管夹，常规缝合皮肤切口。伤口常规消毒

(13)停止吸入麻醉，小鼠自然苏醒，伤口涂布利多卡因凝胶镇痛。

(14)如需进行溶栓操作，在栓塞一段时间后再次麻醉小鼠。尾静脉插管。先静脉推注 rt-PA 总量的10%，在 30 min内输注余下的90%，以体重25g小鼠为例，静脉给药总量为0.1mL。

(15)溶栓后的小鼠自由进食饮水。

四、模型评估

(1)小鼠苏醒1小时后，采用Bederson评分法进行神经行为学评估：

0分：前肢正常伸展；

1分：对侧前肢内收；

2分：对侧前肢抓握力下降；

3分：拉尾时肢体倾斜；

4分：平面上旋转或翻滚；

5分：无自主活动且24小时内死亡。
评分≥2分视为造模成功，2~3分为测试药效的理想分数。

(2)脑血流是造模成功的关键指标，可用激光散斑仪监测。手术侧脑血流降至对侧20%以下即为成功。

(3)取小鼠脑组织进行TTC染色，切片后孵育TTC溶液和多聚甲醛，用mageJ软件计算梗死面积和体积。

五、讨论

本缺血性脑卒中模型的成功率为70%~80%，关键技术要点如下：

(1)血栓形成时，需确保颈总动脉松弛，避免过度拉扯导致血流减慢、血栓不足或栓块过硬粘壁，从而影响造模成功。

(2)电击夹应与动脉同向，并稍抬远心端以增血栓量，防血栓直冲颈内动脉。

(3)从远心端逐渐夹碎血栓，观察血流冲击确认粉碎。两次电击，首次短促损内皮助二次成栓，首次血栓少且易碎，均需充分粉碎后入颈内动脉。

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