脑立体定位注射

一、脑立体定位注射介绍

       脑立体定位技术广泛应用于脑研究，精确定位损毁、刺激及脑电记录，是探索脑结构与功能的关键工具。该技术依托立体定位仪，结合颅骨外标志与三维坐标系统，精准定位皮层下神经结构。无需直视，即可进行刺激、破坏、药物注射或电位引导等实验。大鼠、小鼠、猫及鸟类等常用实验动物，其外耳道为重要定位参考。依据脑图谱数据，实现精准操作，成为神经科学各领域不可或缺的研究手段。

二、实验器材

      脑立体定位仪、颅骨钻及钻头、手术剪刀、止血钳、镊子、缝合针线、剃毛器、消毒酒精、碘伏、生理盐水等。

三、实验步骤

(1) 准备玻璃电极与微量进样器：两者均注入液体石蜡油，确保无气泡。将电极装配于进样器尖duan，密封连接处以热熔胶，静待固化。随后，将组装好的进样器稳妥安装于立体定位仪，调整至垂直且稳固状态，为实验操作奠定精准基础。

(2)以5%水合氯醛腹腔注射小鼠，约5分钟深麻达成。剃除头部毛发，小鼠固定于适配器，眼部涂眼膏保护。双侧耳杆插入外耳道，调整至刻度相同并紧固，确保头部居中。门齿轻夹于固定器，避免过紧。准备完毕，小鼠处于稳定麻醉状态。

(3)暴露颅骨:70%酒精消毒小鼠头皮，随后用剪刀将头皮剪开一条长约2cm的创口，用干的卫生棉球擦掉颅骨表面的软组织，完全暴露颅骨。

(4)定前囟:将注射针尖移至中缝线靠前部位，接触颅骨表面，以前囟位置(bregma点)为参考点，刚接触到表面时，停针，将数字显示仪的X，Y，Z轴坐标读数归零。下针的时候，用显微镜观察针尖位置,以免折断针头!

(5)左右调平:将进样器向上提起少许，以免碰到颅骨表面，然后以bregma为中点左右移动相同的距离(推荐3.0mm/2.5mm/2mm)并下针接触颅骨表面，分别读对应点Z坐标，通过Z坐标的数值来确定左右是否齐平，如果读数相差0.03mm以内，则认为小鼠脑袋左右齐平。通过调整两边的耳杆高度将左右调平，调整过程中，移动耳杆后必须重新定位bregma零点。

(6)前后调平:前囟点和后囟点调平，方法同左右调炎

(7).用PBS冲洗微量注射器3-5次后，组装微量注射器，根据确定好的深度下降注射器

(8)恢复小鼠脑部切开部位，做好缝合后放归笼中继续饲养观察;为防止感染可给予含抗生素的饲料。

四、参考坐标

侧脑室的位置，如图显示的是比较容易注射的位置

Interaural耳间 3.58mm—3.22 mm

Bregma 前卤 -0.22 mm—0.58 mm

最佳的位置为：X= 1.00 mm  Z= 1.5 mm

Lateral 横向距离，0.60 mm-2.16 mm，最佳位置为0.80 mm

Y= 0.80 mm

最终决定皮层区域的最佳位置

X=1.00 mm, Y= 0.80 mm, Z= 1.5 m

  海马区域：

Interaural 2.58 mm—1.50 mm

Bregma -1.22 mm—2.30 mm

前卤 (Bregma)

海马区域最佳位置，

X=1.5 mm, Y= 2.0mm, Z=2.0mm

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