小鼠缺血再灌注急性肾损伤模型（IRI）经验总结

一、术前准备与动物管理

1.1物品准备细化：

• 保温垫（2个）：确保手术前后小鼠体温稳定，减少因体温下降导致的手术并发症。
  
  
• 动物理发器（1个）：用于剃除手术区域的毛发，减少手术过程中的污染风险。
  
  
• 手术器械：镊子（3-4个）、眼科剪（2个）、微动脉瘤夹（多个）、持针器。
  
  
• 缝合线：根据小鼠体型大小，选择合适的缝合线型号，确保缝合牢固且不易引起组织反应。
  
  
• 生理盐水：用于冲洗手术区域和保持小鼠体内水分平衡。
  
  
• 麻醉药：4%水合氯醛是常用的麻醉药物，但需注意剂量和注射速度，避免麻醉过深或过浅。
  
  

1.2动物选择与饲养：

• 性别与周龄：雄性C57BL/6小鼠对AKI模型更为敏感，且周龄差异应控制在1周内，以减少个体差异对实验结果的影响。
  
  
• 饲养环境：保持饲养环境的清洁、干燥和适宜的温度、湿度，减少外界因素对实验结果的影响。
  
  

二、手术操作细节

2.1麻醉与消毒：

• 麻醉深度：通过观察小鼠的呼吸频率、肌肉松弛程度和角膜反射来判断麻醉深度。
  
  
• 消毒：使用70%酒精棉签对手术区域进行消毒，注意避免消毒液进入眼睛或鼻腔。
  
  

2.2手术步骤：

• 切口位置与大小：手术从背部1/3处开始，切开左侧皮肤和肌肉，切口大小为1-1.5厘米，以暴露左肾。使用无菌棉签将左肾从切口中推出，以便清晰地看到并处理肾蒂。
  
  
• 肾蒂处理：在夹闭肾蒂前，应仔细去除周围的脂肪组织，避免损伤血管和神经。夹闭时应确保力度适中，避免造成过度损伤。
  
  
• 缺血时间控制：准备好两个肾蒂后，用微动脉夹夹闭右肾蒂，并记录缺血时间。随着肾脏颜色从红色变为深紫色，表明夹闭成功。随后，将右肾放回腹腔，并立即夹闭左肾蒂，同时记录缺血时间。为确保两个肾脏的缺血时间相同，左右肾钳夹之间应相差1-1.5分钟，并分别记录每侧的缺血时间。
  
  
• 灌注：缺血时间达到预定值后，松开动脉夹以开始再灌注。此时，可以观察到肾脏颜色由深紫色逐渐恢复为红色。
  
  

2.3术后护理：

• 保暖与复苏：手术后立即给每只小鼠腹腔内注射0.5毫升温热的无菌盐水，以帮助恢复体液平衡。随后将小鼠置于保温垫上，直到其完全清醒。注意观察小鼠的呼吸、心率和体温等生命体征。
  
  
• 饮食与饮水：术后小鼠可能因手术创伤和麻醉影响而食欲不振。此时应提供易于消化、营养丰富的食物和水源，以促进其恢复。
  

三、实验设计与数据分析

3.1缺血时间的选择：

缺血时间的选择应根据实验目的和前期预实验的结果来确定。建议设置多个缺血时间组别，通过比较不同缺血时间下小鼠的肾功能、组织学变化和生存率等指标，选择最适合自己实验的缺血时间。

3.2数据收集与分析：

• 肾功能指标：如血清肌酐、尿素氮等，用于评估AKI的严重程度和恢复情况。
  
  
• 组织学检查：通过显微镜观察肾脏组织的病理变化，如肾小管坏死、炎症细胞浸润等。
  
  
• 生存率分析：记录小鼠的存活情况，分析不同缺血时间对生存率的影响。
  
  

3.3注意事项：

• 在实验过程中，应严格遵守动物伦理和实验规范，确保动物福利和实验结果的可靠性。
  
  
• 定期对手术器械和实验环境进行消毒和清洁，减少感染风险。
  
  
• 对实验数据进行客观、准确的分析和解读，避免主观偏见对实验结果的影响。
  

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