LLC(小鼠肺癌细胞)培养

一、细胞介绍

细胞名称：LLC(小鼠肺癌细胞)

细胞别称：LL/2 (LLC1); LL/2 (LLc1); LL/2(LLc1); LL/2; LL2; LLC1; LLC; Lewis lung carcinoma line 1; Lewis lung carcinoma; Lewis-Lung; Lewis Lung

生长特性：贴壁

培养条件：DMEM+10% FBS+1% P/S

培养环境：空气，95%；二氧化碳 (CO2)，5%；37℃

细胞简介：LLC细胞源自C57BL小鼠肺癌，由Lewis肝癌诱发，展现出对特定化疗药物（如1,3-双-（2-氯乙基）-1-亚硝基脲）的抗药性，而对甲氨蝶呤敏感。这些细胞具有高致瘤潜能，能在同源小鼠体内形成肿瘤但转移能力有限。在培养条件下，LLC细胞形成多层而非融合单层，且对鼠痘病毒检测呈阴性。因此，它常被用作癌症转移研究模型，尤其在探讨化疗药物作用机制方面具有重要价值。

二、LLC细胞培养注意事项

（1）细胞形态多样性与培养适应性

LLC细胞展现丰富的形态多样性，包含上皮样与圆形细胞，两者以贴壁方式共存，比例各异。在培养过程中，需注意细胞状态，适量处理漂浮细胞，以维持细胞群的健康。

（2）快速生长与营养需求

这些细胞具有快速增殖的特点，要求培养基充足，以避免营养不足导致的生长问题。密切监测培养基颜色及细胞密度，适时换液与传代，是保障细胞活力的关键。

（3） 密度控制以防堆叠

高密度培养环境下，LLC细胞易堆叠生长，影响细胞质量。因此，需精细控制细胞密度，避免过度拥挤。

（4）血清质量至关重要

LLC细胞对血清品质敏感，推荐使用高品质胎牛血清。更换血清品牌时，需逐步过渡，以避免细胞应激反应。

（5） 贴壁特性与操作注意事项

该细胞贴壁能力较弱，消化时需精确控制时间，以防过度消化。同时，注意避免运输、温度波动等外部因素导致的细胞回缩或脱落，通过及时恢复培养条件，可帮助细胞恢复正常状态。在传代换液前，预热培养基与试剂，减少室温暴露时间，有助于维持细胞稳定。

三、方法

（1）LLC细胞传代方法

准备与预热：备齐培养基、胰蛋白酶、PBS、离心管、培养瓶及移液工具，并预热所需试剂。

清洗旧培养基：移除旧培养基，加入5mL PBS轻洗细胞10-20秒后吸走。

胰酶消化：加1mL胰酶轻摇覆盖细胞，置37℃培养箱至细胞收缩但未脱落。

终止消化：加2-3mL完全培养基中和胰酶，防止细胞受损。

离心与重悬：混合消化液，离心3分钟（1000rpm），去上清，重悬细胞。

准备培养基：按T25/10mL或T75/20mL的比例加入预热培养基。

接种与培养：均匀接种细胞至新培养瓶，轻摇混匀，放入培养箱，保持透气。

（2）LLC细胞冻存方法

制备与标记：配制冻存液，准备冻存管并标记。

细胞处理：消化细胞，离心去上清得沉淀。

细胞冻存：用冻存液重悬细胞，移入冻存管。

初步冷冻：置冻存管于程序性冻存盒，-80℃过夜。

长期保存：转至液氮，记录位置。

（3）LLC细胞复苏方法

预热与准备：预热水浴锅至37℃，培养基至室温或37℃，设定离心机转速。

细胞解冻：安全取出冻存管，无液氮后浸入水浴，轻摇至米粒冰晶即停，全程不超2分钟。

离心：解冻后直接离心，约150g（或900rpm），2分钟，注意机型差异。

接种：去上清，加预热培养基重悬细胞，接种新瓶，轻摇混匀后培养。

复苏评估：复苏24小时后观察细胞贴壁情况。

（4）LLC细胞收货方法

常温细胞：

收货与静置：收货去包装，T25瓶酒精消毒后，37℃静置至少4小时。

细胞评估与操作：留10-12mL培养基拍照记录，密度>80%则按1:2传代；<70%则续养至≥80%再传代。

冻存细胞：

收货处理：收到细胞后应迅速开箱核查，若附有足量干冰，可立即将细胞转移至-80℃冰箱短期保存（推荐2-3天内复苏），或长期存放于液氮中。若干冰已耗尽，建议即刻复苏细胞，并通知销售人员处理。

复苏验证：为确保细胞质量及避免过期风险，推荐尽快复苏一管细胞进行培养检查，具体操作可参考提供的复苏指南。

异常处理：在复苏或培养过程中如遇任何问题，如细胞状态异常，请立即联系销售人员，并在专业技术团队的指导下采取进一步措施。

四、问题及解决方案

（1）细胞密度如何计算的？

细胞密度在培养中，常以占容器底面积比例估算，虽不精确（因细胞间生长密度差异），却直观反映状态。实际操作中，无需频繁消化计数，此法简便快捷，是监控细胞生长状态的实用手段。注意，结果受细胞形态影响，需结合其他方法综合评估。

（2）培养过程中细胞碎片较多的处理方法？

细胞内黑颗粒为自然分泌泡与细胞器折光，属常态，不影响功能。不同细胞表现各异，培养条件不佳可能加剧。建议优化培养环境。

细胞外黑颗粒多为碎片与代谢物，定期换液可清除。建议每两天换液，前需预热培养基，保持环境清洁。

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