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干货!小鼠的安乐死、解剖实验分享

发布日期:2023-12-20

小鼠的尸体剖检是科学研究过程中最基础和最重要的一个环节,而这个过程需要一个有经验的老司机带着。我们将带你走进科研的殿堂,助你从实验小白变成科研达人!

避免组织的自我分解

小鼠死后由于缺血导致的低氧,组织会立刻发生分解(Slausonand Cooper 2000)。比如,小鼠的小肠在其死后10分钟就会发生分解即肠绒毛肿胀和绒毛上皮的剥蚀(Pearsonand Logan 1978a,b);另外小鼠的骨髓和肾上腺也很容易发生自我分解。为了避免组织的自我分解,小鼠的尸体要保存在2-4°C的冰箱里,而其在温暖的环境中更容易降解。

符合动物伦理学的安乐死法

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1.二氧化碳室息(carbon dioxide asphyxiation) :尽管二氧化碳室息是一种快速和仁慈的小鼠安乐死方法,但也可引起小鼠肺脏等出血,因此缓慢增加二氧化碳浓度对于减少小鼠临死前出血减轻小鼠痛苦是必要的(Seymouretal.2004)。
2.过量的巴比妥酸盐(barbiturate overdose):是一种有效的小鼠安乐死方法。
3.颈椎脱白(cervical dislocation):其于1972年被AVMA Panel-onEuthansisa被认定为小鼠安乐死的一种快速有效方法(Carb-oneetal.2012)。但是,颈椎脱白不仅会破坏小鼠的颈部组织,还易出现小鼠体腔出血(Seymouretal.2004)。另外,有研究表明小鼠进行颈椎脱臼后,有大约21%的小鼠还有呼吸,安乐死失败(Ca-rbone2012)。

注:成年小鼠避免采用断头处死因为这个方法不被theethicscommitteeofaninstituteortheHomeOffice(United Kingdom)接受(Seymour et al.2004)。
 

采血样本

1.小鼠处死后如需采血,可以采用心脏穿刺采血。在小鼠剑突骨中心右侧2mm处进针(如下图所示)但是这种方法会损害心肌组织,导致血中酶含量增加。
2.麻醉的小鼠可以采用内毗采血截尾采血等。
注:熟练的操作人员每只小鼠可采血0.6-08ml。

 

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灌注

为了减少组织自溶,最大可能保持形态学以及组织抗原的完整性,小鼠往往需要进行灌注处理。灌注的方法多种多样,而且常常需要特殊的设备。我们在这里介绍一种较为简单易行的灌注方法:
1.准备两个10ml注射器,一个装生理盐水,一个装10%中性福尔马林。
2.用01ml/10g体重的成巴比妥腹腔注射麻醉小鼠。3.打开小鼠胸腔颈静脉暴露在唾液腺下方。

3.打开小鼠胸腔颈静脉暴露在唾液腺下方。

4.切断颈静脉用注射器向左心房注射4-8ml生理盐水,随后生理盐水从切断的颈静脉流出。

5.最后,用注射器向左心房注射4-8ml10%中性福尔马林。

6.灌注后的组织会变硬,呈灰色(Seymour et al.2004)。


小鼠的外观检查



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器官的称重

称量器官的重量的时候一定要去除器官周围的脂肪和结缔组织

固定小鼠并分离皮肤

1.固定小鼠:首先用70%-95%的乙醇对小鼠腹部进行消毒;用注射器的针头将小鼠的四肢固定在包有锡箔纸的泡沫板上。
2.分离皮肤:用剪刀从与小鼠耻骨水平的中线处剪一个小口子,然后沿着中线纵向剪开皮肤直到颊,最后用镊子顿性得将皮肤与腹膜壁分开,可见皮下组织、浅表淋巴结、乳腺、阴茎、骨骼肌。
注:皮下组织有胶状的液体,提示有水肿,一般发生在严重的慢性肾衰、心衰或者肝脏衰竭的小鼠中。如果其颜色呈白色,暗示有贫血呈黄色,提示有黄疽。

 淋巴结


认识淋巴结的位置:淋巴结是小的豆装结构,正常小鼠的淋巴结很小不易找到。mandibular(A),deepcervical(B),superficialparotid(C),axillary(D),accessory axillary (E),tracheobronchial(F), cau-dalmediastinal(G),gastric (H), renal(1), mesenteric (J), inguin-al/subiliac(K), medialiliac (L) and popliteal(M) lymph nodes.

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