大鼠的基本实验操作技术（一）

本文详细阐述了在大鼠实验中涉及保定、药物给予、麻醉处理、样本收集以及实施安乐死等关键步骤的操作技巧，同时指出了实验过程中应当留意的事项、常见的问题及其应对策略。其目的在于指导实验室技术人员熟练掌握大鼠实验的基本操作流程，以保障实验数据的精确性和可信度。

一、大鼠的保定

保定，指的是通过手工操作或利用器械对动物个体的活动进行部分或全面的约束，以便顺利进行诸如检查、样本采集、药物施用、治疗或实验操作等活动。它是开展所有动物实验前不可或缺的一个基础环节。

1. 徒手保定

提起大鼠尾部，左手轻扣其背，拇指与四指捏住颈背皮肤反转，使大鼠腹部朝上。小个体大鼠可用拇指食指夹腋下，其余手指握体，同样反转使腹部朝上。

2. 器械固定

根据需要，可选器械固定大鼠，如烧杯罩身露尾操作，或使用可调节长度的圆筒状大鼠固定器限制其活动，便于尾部操作。

3. 解剖板固定

麻醉后的大鼠可固定于专用解剖板上，按实验所需体位，用纱布条或细棉绳绑定四肢，另外一头可以固定于板周边缘上，必要时可令大鼠腹面向上，用皮筋扣住门齿，以固定头部。 

4. 注意事项

大鼠的切齿锋利，抓取不当或激怒它可能引发咬伤，因此个人防护很重要。提尾时若抓得太靠尾端，大鼠激烈挣扎可能导致尾皮脱落。徒手抓握时，用力过大则可能导致大鼠窒息，故需随时调整握力，避免过紧。

二、供试品给予方法

1. 经口途径

口服法：可将药物混入饲料或溶解于饮水中供大鼠自行摄取。此方法简便易行，但剂量控制不够精确。它适用于疾病防治、药物毒性测试及构建与食物相关的人类疾病动物模型等实验场景。

灌胃法：急性实验中常用灌胃法给药。灌胃器含注射器和长约6～8cm、直径约1.2mm的灌胃针，针尖焊有中空金属球以防误伤。左手固定大鼠，右手持灌胃器，将针从口腔插入，经咽后壁入食道（深4～6cm），略调方向促其吞咽后推入药液（1ml/100g体重，总量1～4ml），注意动物反应，完成后轻拔针头。

2. 经皮肤途径

大鼠常用于经皮给药实验，尤其是毒性测试。先对其背部脱毛（现常用电动剃刀），然后用固定架固定，涂上药液并用透气材料覆盖固定4小时。之后移除覆盖物，清洗并吸干水分。挥发性药液需在通风橱内操作。

3. 注射途径

皮下注射：一般选取背部皮下及后肢皮下。注射时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤，右手持注射器将针头刺入，把针尖轻轻向左右摆动，容易摆动则表明已刺入皮下，然后注射药物。给药容量为0.1～0.3ml/10g体重。

皮内注射：用注射器紧贴指间皮肤皮层刺入皮内给药，一般不超过0.1mL。

肌内注射：肌内注射一般选用肌肉发达、无大血管经过的部位。注射时针头要垂直快速刺入肌肉，如无回血现象即可注射。注射部位宜选大腿外侧肌群。

静脉注射：大鼠的静脉注射常采用尾静脉注射，一次的注射量为0.1～0.2ml/10g体重。

腹腔注射：每次注射药物量宜1ml/100g以内，最大不超过2ml/100g。

4. 其他途径给药

呼吸道给药：适用于粉尘、气体、蒸汽或雾态药物，常用于乙醚麻醉和毒理学实验等。

脑内给药：常用于微生物学实验，固定大鼠后，在前额正中垂直进针2～3mm，注射量约0.03～0.05ml。

直肠内给药：直肠内给药时，先排出大鼠直肠粪便，固定后将光滑针头插入肛门，顺直肠推进药液，同时缓慢退针。

三、样品收集

1. 血液采集

尾静脉采血：适用于小量血液需求，如血细胞计数和血红蛋白测定。麻醉动物后，消毒尾部皮肤并划破尾动脉或静脉采血，之后消毒止血。多次采血从尾尖开始。

眼眶后静脉丛采血：使用特制取血管，浸入肝素溶液后干燥。固定动物头部并压迫颈部，使眼球突出、静脉丛充血。将取血管插入眼角与眼球间，旋转切开静脉丛采血。每次可采0.5-1.0ml。

股静脉/动脉采血：大鼠常用。麻醉后剪开腹股沟皮肤，可见股静脉，剪断或注射器采血。股动脉需先剥离组织。

腹主动脉采血：大鼠麻醉仰卧，剖开腹腔暴露腹主动脉，注射器向心方向刺入采血。适用于实验结束时的大量采血。

2. 尿液及粪便采集

代谢笼法：将大鼠放在特制的代谢笼内，动物排便时，可以通过笼子底部的大小便分离漏斗将尿液与粪便分开，达到采集的目的。由于大鼠尿量较少，操作中的损失和蒸发，大鼠膀胱排空不一致等，都可造成误差，因此一般需收集5h以上的尿液，最后取平均值。如需要测定尿中活性成分，尿液收集瓶应置于冰袋中，或采用可以制冷的代谢笼。

反射排尿法：大鼠被人抓住尾巴提起时排便反射比较明显。故若需采取少量尿液时，可提起大鼠，将排出的尿液接到带刻度的容器内。用手指轻轻按摩大鼠直肠两侧，也可刺激大鼠反射性排出粪便。

3.精液采集

电刺激采精：使用大鼠固定板、电极和电源。大鼠保定后，清洁并干燥包皮，电极插入直肠近输精管处。调整电刺激参数（频率20～30Hz，电压3～12V，电流4～12mA，每次1～3秒，间隔2～5秒）至射精，收集精液。

附睾内采精：处死性成熟雄性大鼠，摘取睾丸和附睾，去除杂质后剪开附睾尾，收集成熟精子团。

阴道栓涂片：交配后4～24小时，从雌性动物生殖道内取出阴道栓，涂片染色观察精液。

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