中医病证相符的糖尿病慢性皮肤溃疡大鼠造模方法初探

目的： 观察不同造模方法致糖尿病大鼠慢性皮肤溃疡创面形态及愈合时间的影响。

1. 材料

1.1 实验动物

种类和数量：

SPF级雄性SD大鼠50只

年龄于体重：

6-7周龄，体重200~220g。

饲养环境：

屏障动物实验设施。

饲养条件：

温度2022℃，相对湿度40%60%，12h光照、12h避光循环。

1.2 试剂与仪器

链脲佐菌素(STZ)，柠酸、柠檬酸钠、氢化可的松注射液、金黄色葡萄球菌、血糖仪及其配套试纸。

1.3仪器

光学显微镜、照相机。

2. 方法

2.1 动物分组及模型制备

50只大鼠随机分为5组，每组10只。

分组：

皮肤缺损组(OS组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病加菌组(DMJJ组)、糖尿病加激素组(DMJS组)、糖尿病加激素加异物组(DMYW组)。

糖尿病模型：

腹腔注射STZ 55mg/kg，72h后测随机血糖，成模标准为血糖>16.7mmol/L。

皮肤溃疡模型：

糖尿病成模两周后开始造模，DMJS组和DMYW组大鼠连续3天注射氢化可的松20mg/kg。麻醉后脱毛，剪去全层皮肤至筋膜，DMJJ组喷酒金黄色葡萄球菌，DMYW组缝上塑料环。

2.2 样本收集与处理

溃疡模型12天后，禁食12h，称重，麻醉，取血，处死大鼠，剪下创面处新生组织，固定。

2.3 观测指标

一般情况：

观察大鼠行为、疮面形态、粪便等。

血糖：

注射STZ后24、72h，以后每周测一次。

创面愈合情况：

用透明塑料薄膜勾勒创面边缘以记录创面面积,计算创面愈合率。创面愈合率=(初始面积-未愈合面积)/初始面积x100%。

2.4 统计学方法

使用SPSS17.0软件，数据采用z±s表示，进行重复测量的方差分析，P<0.05认为有统计学意义。

3. 结果

3.1 大鼠血糖变化情况

QS组大鼠饮食正常，而糖尿病大鼠则现多食、多饮、多尿症状。72小时后，除QS组外，各组血糖均超16.7mmol/L，并持续两周保持高血糖状态。

3.2 大鼠体重变化

造模前大鼠体重均衡，造模后分组与时间显著影响体重（F=12.762, P<0.01），时间单因素亦显著（F=370.938, P<0.01）。造模导致OS组与糖尿病组间体重差异显著（F=29.686, P<0.01）。

3.3 大鼠溃疡愈合情况

不同造模法显著影响愈合率（F=62.638, P<0.01），其中DMYW组愈合率最低，DMJJ组初期愈合较快。时间也显著影响愈合率（F=519.803, P<0.01），且两者间存在交互作用（F=8.576, P<0.01），表明愈合过程受造模方法与时间共同调控。

3.4 大鼠一般情况及创面情况

QS、DM、DMJJ组大鼠状态佳，活动自如；而激素与异物组则状态欠佳，体重增长停滞，行为迟缓，伴有冷尾、多尿、少食及大便异常。QS组愈合初期肉芽鲜红湿润，愈合良好；DM组肉芽色转暗，伴黑褐色痂皮；DMJJ组初中期有黄色脓稠分泌物，后期痂皮黑褐色；DMJS组初期分泌物清稀，肉芽色淡，中后期色泽晦暗；DMYW组初期分泌物清稀，肉芽被遮，中后期变化未详。

3.5 创面肉芽组织病理染色结果

HE染色示QS组大鼠皮肤结构完整，表皮含角质层，真皮层血管丰富；DM组真皮层胶原纤维细且伴炎症，无新生血管；DMJJ组表皮多层，含组织液、炎症细胞及少量血管；DMJS组真皮边缘无表皮，少量炎症及组织液；DMYW组则无表皮生成及愈合迹象。Masson染色下，QS组胶原纤维粗长有序；DM组较粗但量少无序；DMJJ组短小零星；DMJS组细而杂乱；DMYW组则生成少且散乱。

4. 讨论

中医证候动物模型对中药筛选与机制研究至关重要。传统糖尿病皮肤溃疡模型难反映中医证候。本实验通过STZ诱导糖尿病，结合皮肤缺损、激素干预与异物埋置，创新性地构建了慢性皮肤溃疡阴证模型。此模型大鼠呈现正气不足症状，创面符合阴证疮疡特征，愈合率受激素与异物影响显著。然而，研究未全面考察完全愈合时间，需进一步探索。本实验验证了复合因素造模法的有效性，为中医“阴证”模型慢性皮肤溃疡研究提供了新思路与工具。

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